Anotace:
Lidský galektin-1 (hHal-1) je rozpustný, sekretovaný protein, který nekovalentně váže β-galaktosidy a přispívá k progresi nádorových onemocnění extracelulárními i intracelulárními mechanismy. Se zvýšenou expresí hGal-1 souvisí zejména únik protinádorové imunitě a růstovým supresorům, indukce angiogeneze, zvýšená invazivita a schopnost tvořit metastáze. Ačkoli byla inhibice hGal-1 identifikována jako potenciální terapeutický přístup, stále chybí účinné nízkomolekulární inhibitory hGal-1 s jednocifernou nanomolární afinitou, které by byly vysoce selektivní k hGal-1 oproti lidskému galektinu-3 (hGal-3). Objevili jsme vysoce účinný a selektivní inhibitor hGal-1 na bázi modifikovaných sacharidů označený jako RuTDG, který nese polosendvičový organorutheniový komplex jako klíčový strukturní fragment zodpovědný za vysokou vazebnou afinitu. Cílem tohoto projektu je vyhodnotit pomocí testů na buněčných a myších modelech protinádorovou aktivitu RuTDG a sloučenin získaných jeho strukturními modifikacemi. V první fázi bude proveden počáteční screening inhibitorů odvozených od RuTDG, který bude zahrnovat stanovení in vitro afinity k lidskému a myšímu galektinu-1 a ‑3, rozpustnosti, stability v roztoku, vazby na plazmatické proteiny, cytotoxicity a mikrosomální stability. Cytostatické, antimigratorní, antiinvazivní a angiostatické efekty dvou nejúčinnějších inhibitorů budou poté detailně testovány na buněčných modelech jak samostatně, tak i v kombinaci s chemo- a radioterapií. Pro potvrzení specificity účinku budou použity také buněčné linie s manipulovanou expresí LGALS1. Kromě toho bude vyhodnocen účinek inhibitorů na aktivitu imunitních buněk a signalizaci nádorových buněk pomocí 2D a 3D buněčných modelů. Akumulace ruthenia v buňkách bude rovněž stanovena. Molekulární podstata inhibice hGal-1 bude studována pomocí NMR spektrometrie. In vivo protinádorové účinky nejlepších inhibitorů pak budou vyhodnoceny na myších xenograftech a syngenních myších modelech.